Twoim problemem jest to, że powszechną NICOŚĆ mylisz z osobistą PUSTKĄ
TESTY IMMUNOFLUORESCENCYJNE
Q
wykorzystują przeciwciała znakowane barwnikami fluorescencyjnymi:
FITC
izotiocyjanian fluoresceiny,
po wzbudzeniu emituje kolor zielony
TRITC
izotiocyjanian tetrametylorodaminy,
po wzbudzeniu emituje kolor czerwony
Cząsteczki barwnika przyłączone są do cząsteczek immunoglobulin kowalencyjnie
(poprzez grupy aminowe lizyny).
Test immunofluorescencyjny bezpośredni
bakteria
Wykrywa w surowicy/ plwocinie/ wymazie
pacjenta obecność antygenu/ bakterii.
Wynik pozytywny: fluorescencja
obserwowana pod mikroskopem
fluorescencyjnym
przeciwciała znakowane
fluorescencyjnie
Wynik negatywny: brak antygenu = brak
fluorescencji
CDC/Dr. William Cherry
Test immunoflurescencyjny. Bakterie
Legionella pneumophila
TESTY IMMUNOFLUORESCENCYJNE
Test immunofluorescencyjny pośredni
Wykrywa w surowicy/ plwocinie/ wymazie pacjenta przy pomocy znakowanych
fluorescencyjnie przeciwciał immunoglobuliny, które uprzednio związały się ze
swoistym antygenem.
Charakteryzują się większą czułością.
Wynik pozytywny: fluorescencja
obserwowana pod mikroskopem fluorescencyjnym
Wynik negatywny: brak przeciwciał = brak fluorescencji
Diagnostyka kiły
Wykrywanie autoprzeciwciał
przeciwjÄ…drowych
(układowe schorzenia autoimmunizacyjne)
T. pallidum
Skrawek
tkanki
Dodajemy surowicÄ™ pacjenta
Przeciwciała
pacjenta
Przeciwciała
pacjenta
Dodajemy przeciwciała
znakowane fluorescencyjnie
przepłukujemy
Jeśli pacjent
był/jest zakażony
kiła, obserwuje się
świecenie krętków
ANA test
Krętek kiły
JÄ…dro
komórkowe
www.primer.ru/std/gallery_std/ treponema.htm
https://courses.stu.qmul.ac.uk/smd/kb/pathology
/funmedpics/pathtes2.htm
TESTY IMMUNOENZYMATYCZNE
Q
wykorzystujÄ… reakcje enzymatyczne do uwidocznienia reakcji
immunologicznej.
Cząsteczki enzymu związane są kowalencyjnie z przeciwciałami lub z biotyną.
Najczęściej stosowane enzymy:
immunoglobulina
z czÄ…steczkÄ… enzymu
•
peroksydaza chrzanowa
•
alkaliczna fosfataza
Po dodaniu do próbki substratu - chromogenu, enzym przekształca go w barwny
produkt. W miejscu związania się przeciwciał pojawia się kolorowy precypitat.
Testy immunoenzymatyczne charakteryzują się większą czułością niż testy immunofluorescencyjne,
ponieważ jedna cząsteczka enzymu związana z przeciwciałami może katalizować powstanie wielu
czÄ…steczek produktu.
chromogen
Najczęściej stosowane substraty:
•
DAB
kolorowy
precypitat
•
AEC
•
4-chloro-1-naftol
Aby zwiększyć czułość reakcji immunoenzymatycznej można stosować przeciwciała
znakowane awidyną (białko jaja kurzego) lub streptawidyną (białko
Streptomyces
griseus
), które wykazuje silne powinowactwo do biotyny (witamina H). Enzymem
znakuje się wówczas biotynę.
Q
wykrywajÄ… antygen
in situ
(w tkankach) - testy immunohistochemiczne
Q
wykrywają antygen lub przeciwciała w roztworze - test ELISA
TESTY IMMUNOHISTOCHEMICZNE
Utrwalony
skrawek tkanki
Po każdym etapie preparat
przepłukuje się buforem
Dodajemy swoiste
przeciwciała
Dodajemy znakowane enzymem
obcogatunkowe przeciwciała wiążące
immunoglobuliny swoiste wobec antygenu
Dodajemy chromogen
W miejscu zwiÄ…zania siÄ™
swoistych przeciwciał powstaje
nierozpuszczalny barwny produkt
ZASTOSOWANIE TECHNIK
IMMUNOHISTOCHEMICZNYCH
IMMUNOHISTOCHEMICZNYCH
Wykrywanie czynnika zakaźnego w tkankach
Wykrywanie określonego białka w tkankach
można stwierdzić obecność w tkankach
określonego czynnika zakaźnego
można śledzić ekspresję określonego genu
w tkankach
Obecność wirusa
syncytium nabłonka dróg
oddechowych
(Respiratory syncytial virus, RSV)
w tkance płucnej niemowlęcia pobranej post mortem
Wyraźnie widoczne zakażone komórki nabłonkowe
oskrzeli.
Obecność enzymu indukowalnej syntazy tlenku
azotu w naskórku objętym łuszczycą. Widoczne
mikroropnie Munro.
© 2005 Novocastra Laboratories Ltd
Wykrywanie markerów różnicowania
Wykrywanie określonego białka w komórkach
można śledzić ekspresję określonego genu
w komórkach hodowanych in vitro
można śledzić ekspresję określonego genu
w komórkach hodowanych in vitro
Obecność syntazy tlenku azotu
w keratynocytach i melanocytach
Markery różnicowania melanocytów
ZASTOSOWANIE TECHNIK